Hoechst 33342，也稱 bisBenzimide H 33342 或 HOE 33342，是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料，對細胞毒性較低。Hoechst 33342染色常用于細胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。Hoechst 33342 也常用于普通的細胞核染色，或常規的 DNA 染色。Hoechst 33342 和雙鏈 DNA 結合后，最大激發波長為 350 nm，最大發射波長為 461 nm。本產品可用于固定細胞或組織的細胞核染色，也可用于活細胞或組織的細胞核染色。

操作說明

使用前用生理鹽水或 PBS 將 Hoechst 33342 染色液稀釋 100 倍，即為工作液10 μg/ml。

1.對于固定的細胞或組織：

1)，細胞或組織樣品：樣本固定后，適當洗滌去除固定劑。隨后如果需要進行免疫熒光染色，則先進行免疫熒 光染色，染色完畢后再按后續步驟進行 Hoechst 33342 染色。如果不需要進行其它染色，則直接進行后續的 Hoechst 33342 染色。

2)，貼壁細胞或組織切片：加入少量 Hoechst 33342 工作液，覆蓋住樣品即可；對于懸浮細胞，至少加入 待染色樣品 3 倍體積的工作液，混勻。室溫放置 3-5 分鐘。

3)，吸除 染色液，用 TBST、PBS 或生理鹽水洗滌 2-3 次，每次 3-5 分鐘。

4)，在熒光顯微鏡下觀察。細胞發生凋亡時，會看到凋亡細胞的細胞核呈致密 濃染，或呈碎塊狀致密濃染。

2.對于活細胞或組織：

1)，加入適當量 Hoechst 33342 工作液，必須充分覆蓋住待染色的樣品，通常對于六孔板一個孔需加入 1 mL 工作液，對于 96 孔板一個孔需加入 100 μL 工作液。

2)，在適宜于細胞培養的溫度下培養 20-30 分鐘。棄染色液，用 PBS 或培養液洗滌 2-3 次即可進行熒光檢測。

保存條件

-20 ℃避光保存，一年有效。

注意事項

1)，熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當天完成檢測，活細胞或組織染色后應立即觀察。

2)， Hoechst 33342對人體有害，操作時請小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。

3)，本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。